产品说明

UDG酶可催化水解含有尿嘧啶的 DNA链的尿嘧啶碱基和核糖磷酸骨架间的N-糖苷键，释放游离尿嘧啶。本尿嘧啶 DNA糖苷酶（UDG）来源于海洋低温细菌udg基因，经重组表达与多步蛋白纯化而得。该酶分子量为 25KDa，催化含尿嘧啶的单链和双链 DNA释放游离尿嘧啶，对 RNA无活性。

UDG酶常用于防止 PCR扩增产物的交叉污染，其作用原理基于：在 PCR反应中以 dUTP替代dTTP掺入 DNA中，形成了含 dU碱基的 PCR扩增产物，UDG能选择性断裂单链和双链 DNA 中 U碱基的糖苷键，降解 PCR扩增产物，消除上轮扩增产物对新样本的污染问题。

本公司的热敏 UDG 2.0来源于嗜冷细菌，在15-30度均具有较高活性，在37-40度失活，比本公司的热敏UDG（目录编号AE1102）更加热敏，非常适合用于防止 PCR扩增产物的交叉污染。由于大肠杆菌 UDG经高温失活，降温到低温后，活性会部分恢复；因此不建议利用大肠杆菌UDG酶进行防止 PCR扩增产物的交叉污染。

本公司热敏UDG2.0是重组表达，并经多步纯化制备的重组蛋白。

活性定义

20℃反应条件下，每分钟催化 60 pmole尿嘧啶碱基从含尿嘧啶的双链 DNA（dU/dA）上释放所需要的酶量为1 U。

活性测定条件

Taq PCR Buffer：10 mM Tris-HCl (pH 8.3, 25°C)，20 mM KCl, 10 mM (NH₄)₂SO₄，0.01% Tween 20，1.5 mM MgCl₂ 中，20度温育。

浓度：1U/μl

保存条件：-20℃保存

特点：

Ø 10-30度均具有较高活性；

Ø 在35度开始失活，40度处理10分钟失活90%，40℃处理15分钟，完全不可逆失活。

Ø 非常适合用于防止PCR扩增产物的交叉污染

Ø 本酶的反应体系与 Taq DNA聚合酶 buffer相同，保证了活性体系的一致性。

适用范围

Ø 防止PCR扩增产物的交叉污染的极佳优选酶。

产品包装规格及组成

质量控制

无内切酶活性：50 U 的本酶和1 μg的 pBR322 DNA 在 37℃下反应 2 小时，DNA 的电泳谱带不发生变化。

酶贮存缓冲液

20mM Tris-HCl (pH7.5),100mMNaCl, 1mMEDTA, 1mMDTT, 0.05%Tween20,50% glycerol。

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AE0101: Taq DNA Polymerase

应用举例

防止PCR产物污染的使用方法

1. 按如下表格配制PCR反应液

2. 20-25℃下反应10分钟。

3. PCR反应。

警告: 本产品仅限科研实验使用，临床应用安全性和有效性未鉴定，不可用于医疗临床诊断。

注意事项

1. 本公司热敏UDG2.0酶的反应温度可以在 20℃－30℃ 的范围内变化，建议在 20-25度反应。

2. UDG切割含dU碱基的ssDNA活性最高，大概是dU/dA双链DNA的5-10倍，各种底物的活性顺序为：dU/dA < dU/dG < dU/dC ≈ dU/dT < ssDNA。

3. 长期储存 (非频繁使用; 每月 1-2次 ): -70℃；每天或每周使用: -20℃。尽量避免多次冻融，切勿暴露在温度波动较大之处。温度波动对产品的稳定性有极大影响。

4. UDG可以在 PCR反应前清除不慎污染的 U-DNA分子，对于某个DNA片段的PCR扩增反应，整个操作室必须在所有操作批次的 PCR反应中添加 dUTP，使所有扩增产物都成为 U-DNA。如果仅某次 PCR扩增反应使用 dUTP，T-DNA仍积累，这个抗污染系统也难以起到完全的作用。

5. UDG/dUTP系统是 PCR试剂专用的一种防污染措施，为了防止 PCR产物的污染，尤其是在临检实验室中反复扩增同一片段时，必须严格规范实验室的区域划分和操作。

6. 如果经过换房间、紫外照射、DNase消化等措施后，依然对某个片段存在污染，建议在不同的扩增区重新设计引物，以错开污染片段。

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