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产品说明
E. coli 核酸内切酶 III（Nth）既有 N-糖基化酶活性也有 AP-裂解酶活性。N-糖基化酶活性可释放双链 DNA 上受损的嘧啶碱基，产生一个脱嘧啶（AP）位点。AP-裂解酶活性则切割 AP 位点的 3´ 端，产生一个 5´ 磷酸和一个 3´ 磷酸-α,β不饱和醛。
被核酸内切酶 III 识别并切除的受损碱基包括：尿素、5,6-二羟基胸腺嘧啶、胸腺嘧啶乙二醇、5-羟基-5-甲内酰脲、尿嘧啶乙二醇、6-羟基-5,6-二羟基胸腺嘧啶和甲基羟丙二酰脲。
本公司核酸内切酶 III是重组表达，并经多步纯化制备的重组蛋白。
活性定义
1活性单位指在37℃下， 1×核酸内切酶 III反应缓冲体系下，1小时能切割1 pmole含一个AP 位点的 34 bp 寡核苷酸双链所需的酶量。
活性测定条件
1× Endonuclease III反应缓冲液：20 mM Tris-HCl（pH 8.0），1 mM EDTA，1 mM DTT，37℃ 温育。
浓度：10U/μl
保存条件：-20℃可保存2年，避免反复冻融
特点与应用
Ø 单细胞凝胶电泳（彗星试验）
Ø 损伤DNA修复
产品包装规格及组成
Component | AE1109A | AE1109B |
核酸内切酶 III | 500U | 2500U |
10×核酸内切酶 III Buffer | 0.2ml | 1.0ml |
质量控制
经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。
酶贮存缓冲液
20 mM Tris-HCl（pH 8.0），10 mM EDTA，100 mM NaCl, 1mM DTT
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使用实例：
1）按下表配制反应体系
反应组分 | 体积或浓度 |
10×Buffer | 2µl |
底物DNA | 5-10pmole |
Endonuclease III (10U/µl) | 1µl |
H2O | Variable |
总体积 | 20µl |
2）37℃×60min反应，
3）尿素变性PAGE电泳检测酶切产物，或按实验目的进行后续操作。
警告: 本产品仅限科研实验使用，临床应用安全性和有效性未鉴定，不可用于医疗临床诊断。
注意事项
l 本酶不同于内切核酸酶IV，切断AP位点后，断裂位点的3’末端为磷酸基团，不能够被DNA聚合酶延伸。
l AP裂解酶活性产生的3’末端磷酸基团可以利用内切核酸酶IV去除，生成3’-OH，由DNA聚合酶进行延伸反应
