产品说明
该酶来源于嗜热细菌,为 E. coli 核酸内切酶 III的同源蛋白,具有很好的热稳定性。既有 N-糖苷水解酶活性也有AP-裂解酶活性。N-糖苷水解酶活性可释放双链 DNA 上发生氧化受损的嘧啶碱基,产生一个脱嘧啶(AP)位点。AP-裂解酶活性随后对该位点进行切割。Tma 核酸内切酶 III 识别 DNA 上的无碱基位点、5,6 二羟基胸腺嘧啶和胸腺嘧啶乙二醇等DNA损伤。
本公司Tma 核酸内切酶 III是重组表达,并经多步纯化制备的重组蛋白。
活性定义
1活性单位指在65℃下, 1×Tma 核酸内切酶 III反应缓冲体系下,1 小时能切割 1 pmole 含一个 AP 位点的 60 mer 寡核苷酸双链所需的酶量。
活性测定条件
1× AM Buffer E: 20 mM Tris-HCl(pH 8.8),10 mM KCl ,10 mM (NH4)2SO4,2 mM MgSO4,0.1% Trition X-100,65℃ 温育。
浓度:10U/μl
保存条件:-20℃可保存2年,避免反复冻融
特点与应用
Ø 热稳定性酶,可以在高温下进行DNA修复反应
Ø 单细胞凝胶电泳(彗星试验)
Ø 损伤DNA修复
产品包装规格及组成
Component | AE1108A | AE1108B |
Tma 核酸内切酶 III | 500U | 2500U |
10×AM Buffer E | 0.2ml | 1.0ml |
质量控制
经过严格的质控检测,确保该产品具有最高的活性和纯度。
酶贮存缓冲液
20 mM Tris-HCl(pH 8.0),10 mM EDTA,100 mM NaCl,5mM DTT。
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AE1101:EcUDG
使用实例:
1)按下表配制反应体系
反应组分 | 体积或浓度 |
10×Buffer | 2µl |
底物DNA | 5-10pmole |
Endonuclease III (10U/µl) | 1µl |
H2O | Variable |
总体积 | 20µl |
2)50-65℃×60min反应,
3)尿素变性PAGE电泳检测酶切产物,或按实验目的进行后续操作。
警告: 本产品仅限科研实验使用,临床应用安全性和有效性未鉴定,不可用于医疗临床诊断。
注意事项
l 本酶不同于内切核酸酶IV,切断AP位点后,断裂位点的3’末端为磷酸基团,不能够被DNA聚合酶延伸。
l AP裂解酶活性产生的3’末端磷酸基团可以利用内切核酸酶IV去除,生成3’-OH,由DNA聚合酶进行延伸反应