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产品说明
8-氧代鸟嘌呤 DNA 糖基化酶（8-oxoguanine DNA glycosylase）也称作甲酰胺嘧啶-DNA 糖基化酶（Formamidopyrimidine（fapy）-DNA glycosylase，Fpg），又称为mutM蛋白。其既有 N-糖苷水解酶活性，也有 AP-裂解酶活性。N-糖苷水解酶活性可以切下双链 DNA 上受损的嘌呤碱基，产生一个脱嘌呤（AP）位点。AP-裂解酶活性可以切割 AP 位点的 3´ 或 5´ 端，产生一个具有 3´ 和 5´ 磷酸的碱基缺口，除去 AP 位点。
被 Fpg 识别并切除的受损碱基包括：7,8-二羟基-8-氧代鸟嘌呤（8-氧代鸟嘌呤）、8-羟基腺嘌呤、fapy-鸟嘌呤、甲基-fapy-鸟嘌呤、fapy-腺嘌呤、黄曲霉毒素 B1-fapy-鸟嘌呤、5-羟基-胞嘧啶和 5-羟基尿嘧啶。
本公司Fpg是重组表达，并经多步纯化制备的重组蛋白。
活性定义
1单位指在37℃条件下， 1小时内能够切割 1 pmol 含单个与胞嘧啶配对的 8-氧代鸟嘌呤的 34 bp 寡核苷酸双链所需要的酶量。
活性测定条件
1× AM Buffer A：10 mM Bis Tris 丙烷-HCl，10 mM MgCl2，1mM DTT（pH 7.0 @ 25℃）加入 100 μg/ml BSA，37℃ 温育。
热失活：60℃ 加热 10 分钟。
浓度：8U/μl
保存条件：-20℃可保存2年，避免反复冻融
特点与适用范围
Ø 多种损伤碱基的去除
Ø 单细胞凝胶电泳（彗星试验）
产品包装规格及组成
Component | AE1105A | AE1105B |
Fpg | 500U | 2500U |
10× AM Buffer A | 0.2ml | 1.0ml |
质量控制
经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。
酶贮存缓冲液
20 mM Tris -HCl，50 mM NaCl，0.5mM EDTA，200µg/ml BSA，50% Glycerol，pH8.0@25℃
使用实例：
1、8-oxo-G双链DNA的切割
1）按下表配制反应体系
反应组分 | 体积或浓度 |
10×Buffer | 2ul |
底物：8-oxo-G双链DNA | 1-4 pmole |
EcFpg (8U/µl) | 1ul |
H2O | 补水到20ul |
总体积 | 20ul |
2）37℃×30min反应，
3）变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测DNA切割效果，或按实验目的进行后续操作。
2、损伤DNA的修复
1）按下表配制反应体系
反应组分 | 体积或浓度 |
10×Buffer | 2ul |
底物：氧化损伤DNA | 100-200ng |
EcFpg (8U/µl) | 1-2ul |
H2O | 补水到20ul |
总体积 | 20ul |
2）37℃×30-60min反应，
3）按实验目的进行后续操作，例如建库测序或PCR扩增等。
警告: 本产品仅限科研实验使用，临床应用安全性和有效性未鉴定，不可用于医疗临床诊断。
注意事项
Fpg为双功能DNA糖苷酶，终产物为具有 3´ 和 5´ 磷酸的单碱基缺口，而非AP 位点。
