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产品说明
尿嘧啶DNA糖苷酶(Uracil N-Glycosylase，UNG)又名Uracil-DNA Glycosylase（UDG）, 为来源于E. coli ung基因的重组表达蛋白，分子量为26kDa。它可催化含尿嘧啶的单链和双链DNA（长度大于6个碱基）释放游离尿嘧啶，但对RNA无活性。 UNG主要应用于PCR扩增产物的防污染，作用原理为：如果在PCR反应中以dUTP替代dTTP掺入DNA中，形成了含dU碱基的PCR扩增产物，该酶能选择性断裂单链和双链DNA中U基的糖苷键，降解该PCR扩增产物。
由于大肠杆菌 UDG经高温失活，降温到低温后，活性会部分恢复；因此不建议将本酶用于防止 PCR扩增产物的交叉污染。建议利用本公司的热敏 UDG（目录号 AE1102）进行防止 PCR扩增产物的交叉污染。
本公司Ec UDG是重组表达，并经多步纯化制备的重组蛋白。
单位定义
一个活性单位为每分钟从含有尿嘧啶的双链DNA（dU/dA碱基对）中催化释放60 pmol尿嘧啶所需酶的量。
活性测定条件
Taq PCR Buffer：10 mM Tris-HCl (pH 8.3, 25°C)，20 mM KCl, 10 mM (NH4)2SO4，0.01% Tween 20，1.5 mM MgCl2 中，37℃温育。
浓度：5U/μl
保存条件：-20℃可保存2年，避免反复冻融。
特点
Ø 活性测定buffer为Taq酶Buffer，与多种反应buffer兼容
Ø 虽然本酶高温热处理会失活，但降至低温后活性会部分恢复
Ø 不建议本酶用于防止PCR 扩增产物的交叉污染。
应用
Ø 去除单链或双链DNA中的尿嘧啶碱基
Ø 去除以前累积的PCR扩增的dU-DNA残存污染
产品包装规格及组成
Component | AE1101A | AE1101B |
EcUDG | 200U | 1kU |
10×UDG Buffer | 0.2ml | 1.0ml |
质量控制
经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。
酶保存液
20 mM Tris-HCl, 50 mM NaCl, 1 mM DTT, 50% Glycerol, 0.1% (w/v) Triton X-100, pH 7.5。
相关产品
AE0101: Taq DNA Polymerase，AE1102 Thermolabile Uracil DNA glycosylase
应用举例
防止PCR产物污染的使用方法
1. 按如下表格配制PCR反应液
PCR 组份 | 体积/μl | 终浓度 |
10×Taq 酶 Buffer | 5 | 1× |
dNTPs（2.0 mM） | 5 | 0.2 mM |
dUTP（2.0 mM） | 1-5 | 0.04-0.2 mM |
引物 F（10 μM） | 1.5 | 0.3 μM |
引物 R（10 μM） | 1.5 | 0.3 μM |
Template | 1-5 | / |
热启动 Taq 聚合酶（5U/μl） | 0.5 | 2.5U |
UDG（5U/μl） | 0.5 | 2.5U |
ddH2O | Variable | / |
总体积 | 50 | / |
2. 37℃下反应10分钟，消除可能的dU-DNA污染物。
3. PCR反应。
警告: 本产品仅限科研实验使用，临床应用安全性和有效性未鉴定，不可用于医疗临床诊断
注意事项
l Ec UDG具有较强的耐热性，95℃保温10分钟可以失活95%酶活，但温度降低至常温，该酶会回复大部分活性。因此建议使用本公司的热敏UDG酶，或者酚氯仿抽提去除EcUDG。
l UDG切割含dU碱基的ssDNA活性最高，大概是dU/dA双链DNA的5-10倍，各种底物的活性顺序为：dU/dA < dU/dG < dU/dC ≈ dU/dT < ssDNA。
l 常温下可以用UDG抑制剂蛋白来抑制UDG的酶活性，但UDG抑制剂不耐高温，高温处理会失活UDG抑制剂，导致其不再抑制UDG的活性。
l UDG在较宽pH范围均有活性，最优pH 8.0，不需二价阳离子，高于200 mM NaCl抑制活性。
l 大肠杆菌 UDG酶的反应温度可以在 37-50℃ 的范围内变化，建议在 37℃反应，也可根据实验需要在 37-50℃范围内自由调整反应温度。
l UDG可以在 PCR反应前清除不慎污染的 U-DNA分子，对于某个DNA片段的 PCR扩增反应，整个操作室必须在所有操作批次的 PCR反应中添加 dUTP，使所有扩增产物都成为 U-DNA。如果仅某次 PCR扩增反应使用 dUTP，T-DNA仍积累，这个抗污染系统也难以起到完全的作用。
l UDG/dUTP系统是 PCR试剂专用的一种防污染措施，为了防止 PCR产物的污染，尤其是在临检实验室中反复扩增同一片段时，必须严格规范实验室的区域划分和操作。
l 如果经过换房间、紫外照射、DNase消化等措施后，依然对某个片段存在污染，建议在不同的扩增区重新设计引物，以错开污染片段。
