产品说明：

本产品HSTaq qPCR 2×SuperMix（SYBR Green）是使用SYBR GreenⅠ嵌合荧光法进行qPCR反应的专用预混液。可用于双链DNA和cDNA单链分子的定量分析，样本类型包括基因组DNA、质粒DNA、噬菌体DNA、cDNA等。本产品包含热启动型 Taq DNA聚合酶、dNTPs、SYBR Green和优化的反应缓冲液，浓度为2×。qPCR 反应时，只需加入模板、引物和水，使2×SuperMix溶液的浓度为1×即可进行反应。核心组分热启动Taq DNA聚合酶用抗体法修饰的改造型Taq酶，具有特异性强、检测灵敏度高、扩增产量高等诸多优点。Buffer专门针对qPCR进行了优化，非常适合于进行高特异性、高灵敏度的qPCR检测。某些型号的qPCR仪需要ROX 参比染料。

特点：

•  减少qPCR操作时间。

•  避免因多步操作带来的污染。

•  DNA片段的定量 (≤4 kb)。

•  热启动Taq酶，非特异性扩增导致的假阳性信号低。

•  扩增效率高、稳定性好。

适用范围：

SYBR green 染料型qPCR检测。

保存：

4度保存1个月；-20℃保存1年。

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应用举例：

以下反应举例为 50 μl 标准 qPCR 体系， 仅供参考。实际 qPCR 条件应根据模板、引物、目的片段大小加以优化，确定最佳反应条件。

1.在qPCR管中配制如下混合液

反应体系中各成分的量可根据以下原则自行调整：

l  有些q-PCR仪需要加入参比染料ROX进行校正，参比染料使用请咨询仪器生产商。

l  一般来说反应体系中引物终浓度为0.2 μM即可得到较好的扩增效果。当反应性能比较差时，可以在终浓度0.1 - 1.0 μM范围内调整引物浓度。

l  qPCR灵敏度极高，加入模板量的准确程度对最终定量结果会有很大的影响。对于高浓度模板，推荐将模板稀释10-100倍后加入反应体系中，这样可以有效提高实验的准确性。

2.按下列条件进行qPCR反应

（1）常规扩增条件                          （2）退火延伸一步法扩增条件

注意事项

l  本预变性条件适合绝大多数扩增反应，如模板结构复杂，可将预变性时间延长至3 min，以提高预变性效果。

l  常规变性时间选择10 sec；快速变性时间最短可选5 sec。

l  常规扩增条件的退火温度可以根据引物的Tm值进行调整，当Tm较高时可以提高退火温度，增加扩增条带的特异性。

l  （1）常规扩增条件下，200-300 bp片段延伸时间72度15 sec，200 bp以内片段72度10 sec；（2）退火延伸一步法扩增条件下，200-300 bp片段延伸时间60度30 sec；200 bp以内片段延伸时间60度20 sec。

l  退火延伸一步法扩增条件下的引物Tm值需要高于延伸温度3-5度。

l  仪器类型不同，融解曲线采集程序不尽相同，使用仪器默认融解曲线采集程序即可。

注意事项：

l  不适用于RNA的定量分析，RNA定量请使用本公司的SYBR Green型RT-qPCR 2×SuperMix（AQ0401系列）。

l  本品在4度避光保存3个月内稳定，尽量避免反复冻融，以免造成酶活下降。如每次使用量较少，推荐小份分装使用。

l  使用前请上下颠倒以混匀Master Mix，短暂低速离心后即可使用。请勿vortex避免酶失活，影响定量结果。

l  加样过程中轻柔吹打，如果操作不慎导致SuperMix起泡，需离心方可使用。

l  本品含有荧光染料SYBR Green I，需避光保存，配制反应体系时应尽量避免强光照射。

l  为了防止环境DNA的污染，反应体系配制时请于超净工作台内进行，配制过程中请使用灭菌枪头、反应管

l  由于本品检测灵敏度极高，易被空气中气溶胶污染。因此如经常检测某些特定基因，为了避免气溶胶污染，建议使用本公司的 UDG型 SYBR Green HSTaq qPCR 2×SuperMix (AQ0111系列)

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