产品说明

  Trt DNA聚合酶是大肠杆菌重组表达的嗜热细菌来源的热稳定型DNA聚合酶，分子量为94 kDa。本酶经特殊改造，具有很强扩增能力和延伸速度，扩增片段的长度可达3-5 kb，延伸速度为1 -2kb/ min（72℃）。该酶具有5’→3’聚合酶活性，较弱的5’→3’外切酶活；无3’→5’外切酶活性。扩增产物具有3'-dA尾巴。另外在Mn²⁺离子存在下，Trt DNA聚合酶具有反转录活性，利用该特性，可用该酶在同一管中进行反转录反应与PCR反应（1步法RT-PCR）。

活性定义

   以大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，在72℃、30 min内，将10 nmol脱氧核糖核苷酸掺入到酸不溶物中所需的酶量，定义为一个活性单位（U）。

浓度：2.5U/μl

保存条件：-20℃保存

特点

Ø  本酶经特殊改造，具有很强扩增能力和延伸速度，可在2kb/ min延伸条件下，有效扩增3-5kb的DNA片段；

Ø  热稳定性好：95℃下半衰期超过40 min；

Ø  耐受dUTP，dITP；

Ø  PCR产物具有3’-dA尾巴，可直接用于T/A克隆。

适用范围

Ø  常规PCR扩增；

Ø  菌落PCR；

Ø  TA克隆PCR产物添加3’-dA；

Ø  反转录之后的常规PCR；

产品包装规格及组成

^#本产品不带RT-PCR buffer与专用dNTP，若进行RT-PCR实验，建议购买本公司附带5×RT-PCR buffer的Trt DNA聚合酶。

*附带2mM dNTP混合物。

质量控制

相关测试表明无外源内切酶或外切脱氧核糖核酸酶、核糖核酸酶污染；PCR方法检测无宿主残余DNA，能有效扩增人基因组中的单拷贝基因。

室温放置一周，扩增活性无明显改变；但强烈建议不要在室温下长期放置，用毕放回-20度。

酶贮存缓冲液

10mM Tris-HCl (pH 7.5 at 25°C), 300mM KCl, 1mM DTT,0.1mM EDTA, 0.5mg/ml BSA and 50% glycerol.

应用举例

以下反应举例为50 μl常规PCR体系， 仅供参考。实际PCR条件应根据模板、引物、目的片段大小加以优化，确定最佳反应条件。

*DNA template可参照如下标准（50 μl PCR体系）：

PCR反应条件

1. RT-PCR

以下反应举例为 50 μl 标准 RT-PCR 体系，仅供参考。实际 RT-PCR 条件应根据 RNA 模板、引物、目的片段大小加以优化，确定最佳反应条件。

RT-PCR 反应条件

注意事项

l Trt DNA 聚合酶具有脱氧核苷酸转移酶活性，因此在 PCR 产物 3’末端通常会加上 1 个多余的腺嘌呤。

l 建议在冰上配置 PCR 反应液后，再放入PCR 仪中进行扩增。这有利于提高扩增的特异性， 减少非特异性扩增，得到良好的PCR 结果。

l 如进行 PCR 扩增后，除目的条带外，还伴随其他杂带，建议适当减少体系中的酶用量，以增加PCR 扩增反应的特异性。

l 本公司 10×PCR Buffer 经大量 PCR 反应实例优化而成，然而对某些 PCR 反应存在一个最优的镁离子浓度。若需要优化镁离子浓度，请购买本公司不含镁离子的 buffer 和 MgCl₂/MgSO₄。

l 反转录酶活性需要 MnCl₂ 才能够高效合成 cDNA，本公司 5×RT-PCR Buffer 经大量 RT-PCR 反应实例优化而成，然而对某些 RT 反应存在一个最优的锰离子浓度。若需要优化锰离子浓度，请购买本公司不含锰离子的 5×RT-PCR buffer 和 MnCl₂/MnSO₄。

警告: 本产品仅限科研实验使用，临床应用安全性和有效性未鉴定，不可用于医疗临床诊断。 

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