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产品说明
KlenTaq-S测序酶是Taq DNA聚合酶的改造版，为Taq DNA聚合酶的大片段，并做了基因突变。本酶具有 5’→3’聚合酶活性，无5’→3’外切酶活性和 3’→5’外切酶活性。相比普通Taq DNA聚合酶，KlenTaq-S测序酶具有很强的ddNTP的渗入能力，因此其适用于终止法DNA测序或焦磷酸解反应SNP分析。
本公司KlenTaq-S测序酶是重组表达，并经多步纯化制备的重组蛋白。
活性定义
1活性单位指在72℃下， 1×AM PCR Buffer 1，30 min内将10 nmole dNTP掺入酸不溶性物质所需的酶量。
浓度：5U/μl
保存条件：-20℃可保存2年，避免反复冻融
特点
Ø 尤其适合ddNTP等修饰核苷酸的掺入反应
Ø 相比全长Taq DNA聚合酶，本酶比活性有所降低
适用范围
Ø ddNTP终止法DNA测序（一代测序）
Ø 焦磷酸解反应延伸法SNP分析
产品包装规格及组成
Component | AE0131A | AE0131B | AE0131C | AE0131D |
KlenTaq-S 测序酶 | 250U | 250U×5 | 1250U×4 | 2500U×5 |
10×AM PCR Buffer 1 | 0.5ml | 1.0ml×3 | 5ml×2 | 5ml×5 |
质量控制
相关测试表明无外源内切酶或外切脱氧核糖核酸酶污染。PCR 方法检测无宿主残余 DNA。室温放置一周，扩增活性无明显改变；但强烈建议不要在室温下长期放置，用毕放回-20 度。
酶贮存缓冲液
20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 100 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 0.5% Nonidet P40, 0.5% Tween20, and 50% glycerol.
使用实例：
以下反应举例为 50 μl 标准PCR 体系，仅供参考。实际PCR 条件应根据模板、引物、目的片段大小加以优化，确定最佳反应条件。
1）按下表配制反应体系
组份 | 体积/μl | 终浓度 |
10×AM PCR Buffer 1 | 5 | 1× |
dNTPs（2.0 mM） | 5 | 0.2 mM |
引物 F（10 μM） | 1.5 | 0.3 μM |
引物R（10 μM） | 1.5 | 0.3 μM |
Template | Varable* | / |
KlenTaq-S测序酶（5U/μl） | 0.5 | 2.5U |
ddH2O | Varable | / |
总体积 | 50 | / |
*模板DNA用量参数(50 μl反应体系):
人基因组DNA100-1000 ng ; 微生物基因组DNA 10-100ng；PCR产物 1 ng-10 ng；Plasmid DNA 5-30 ng ; cDNA from RT reaction 1-5 μl。
2）按如下条件进行反应，
95℃ | 2-5 min | |
95℃ | 15 sec | 25-35 Cycles |
55~72℃ | 20 sec | |
72℃ | 1kb/min | |
72℃ | 5 min |
3）琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物，或按实验目的进行后续操作。
注意事项
l PCR条件和野生型Taq DNA聚合酶类似，对特定DNA的测序反应可能需要优化。
l 本酶扩增能力较野生型Taq DNA聚合酶有所降低，PCR产量有所降低，不建议用于常规PCR。
l 不可用于Taqman探针法q-PCR。
