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产品说明
本酶为Taq-D DNA聚合酶（KlenTaq）的热启动版本，需95度加热5分钟或98度加热2分钟而激活。本酶为重组表达的嗜热细菌Thermus aquaticus来源的基因工程改造的外切酶活性缺失型Taq DNA聚合酶（删除了5’ 外切酶结构域）。本酶具有5’→3’聚合酶活性，无5’→3’外切酶活性和3’→5’外切酶活性。扩增产物具有3'-dA尾巴。扩增片段的长度可达3 kb。延伸速度为1.0 kb/min（72℃）。本酶不可用于Taqman探针法q-PCR。尤其适合于溶解曲线法单核苷酸多态性（SNP）分型。同时，较适合扩增血液等含PCR抑制剂的样本。
活性定义
以大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，在72℃、30 min内，将10 nmole脱氧核糖核苷酸掺入到酸不溶物中所需的酶量，定义为一个活性单位（U）。
浓度：5U/μl
保存条件：-20℃保存
特点
Ø 本酶为热启动聚合酶，可提高扩增的特异性，减少非特异性扩增和引物二聚体；
Ø 相比普通Taq DNA 聚合酶，本酶更加适合未处理的血液、组织、唾液等样本的PCR；
Ø 热稳定性好：95℃下半衰期超过40 min；
Ø 模板DNA耐受范围广；
Ø PCR产物具有3’-dA尾巴，可直接用于T/A克隆；
Ø 可以掺入dUTP、dITP、荧光标记核苷酸。
适用范围
Ø 溶解曲线法单核苷酸多态性（SNP）分型
Ø 血液、组织样本等直扩PCR
Ø DNA荧光标记
产品包装规格及组成
Component | AE0125A/ AE0126A* | AE0125B/ AE0126B* | AE0125C/ AE0126C* | AE0125D/ AE0126D* |
HS Taq-D DNA polymerase | 250U | 250U×5 | 1250U×4 | 2500U×5 |
10×Taq-D Buffer | 0.5 ml×1 | 1.0 ml×3 | 5.0 ml×2 | 5.0 ml×5 |
2 mM dNTPs | -/0.5 ml×1 | -/1.0 ml×3 | -/5.0 ml×2 | -/5.0 ml×5 |
*附带2mM dNTP混合物。
质量控制
相关测试表明无外源内切酶或外切脱氧核糖核酸酶污染。PCR方法检测无宿主残余DNA。
室温放置一周，扩增活性无明显改变；但强烈建议不要在室温下长期放置，用毕放回-20度。
酶贮存缓冲液
20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 100 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 0.5% Nonidet P40, 0.5% Tween 20, and 50% glycerol.
应用举例
以下反应举例为50 μl标准PCR体系， 仅供参考。实际PCR条件应根据模板、引物、目的片段大小加以优化，确定最佳反应条件。
组份 | 体积/μl | 终浓度 |
10×Taq-D Buffer | 5 | 1× |
dNTPs（2.0 mM） | 5 | 0.2 mM |
引物F（10 μM） | 1.5 | 0.3 μM |
引物R（10 μM） | 1.5 | 0.3 μM |
Template | Varable* | / |
HS Taq-D（5U/μl） | 0.5 | 2.5U |
ddH2O | Varable | / |
总体积 | 50 | / |
*DNA template可参照如下标准（50 μl PCR体系）：
人类基因组DNA | 0.1 μg-1 μg |
λDNA | 0.5 ng-5 ng |
质粒DNA | 0.01 ng-1 ng |
大肠杆菌DNA | 10 ng-100 ng |
PCR反应条件
95℃ | 5 min | |
95℃ |
| |
55~72℃ | 20 sec | 30 Cycles |
72℃ | 1 min/kb | |
72℃ | 5 min |
注意事项
l 本酶为热启动聚合酶，需95度加热5分钟或98度加热2分钟而激活；因此有利于提高扩增的特异性，减少非特异性扩增和引物二聚体，得到良好的PCR结果。
l Taq-D DNA聚合酶具有脱氧核苷酸转移酶活性，因此在PCR产物3’末端通常会加上1个多余的腺嘌呤。
l 碱基出错率是指在每个碱基合成过程中所掺入的错误核苷酸数目。Taq-D DNA聚合酶的碱基错误率为1×10-5。
l 对非热启动酶而言，建议在冰上配置PCR 反应液后，再放入PCR仪中进行扩增。这有利于提高扩增的特异性，减少非特异性扩增，得到良好的PCR结果。
l 如进行PCR扩增后，除目的条带外，还伴随其他杂带，建议适当减少体系中的酶用量，以增加PCR扩增反应的特异性。
l 本公司Buffer经大量PCR反应实例优化而成，然而对某些PCR反应存在一个最优的镁离子浓度。若需要优化镁离子浓度，请购买本公司不含镁离子的buffer和MgCl2/MgSO4。
警告: 本产品仅限科研实验使用，临床应用安全性和有效性未鉴定，不可用于医疗临床诊断。
