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产品说明
Taq-D DNA聚合酶（KlenTaq），是大肠杆菌重组表达的嗜热细菌Thermus aquaticus来源的外切酶缺失型Taq DNA聚合酶（删除了5’ 外切酶结构域）。因此，本酶具有5’→3’聚合酶活性，无5’→3’外切酶活性和3’→5’外切酶活性。扩增产物具有3'-dA尾巴。扩增片段的长度可达3 kb。延伸速度为1.0 kb/ min（72℃）。不可用于Taqman探针法q-PCR。本酶尤其适合于溶解曲线法单核苷酸多态性（SNP）分型。
活性定义
以大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，在72℃、30 min内，将10 nmol脱氧核糖核苷酸掺入到酸不溶物中所需的酶量，定义为一个活性单位（U）。
浓度：5U/μl
保存条件：-20℃保存
特点
Ø 无外切酶活性，适合于溶解曲线法单核苷酸多态性（SNP）分型；
Ø 热稳定性好：95℃下半衰期超过40 min；
Ø 可以掺入dUTP、dITP、荧光标记核苷酸；
Ø 相比普通Taq DNA 聚合酶，本酶更加适合未处理的血液、组织、唾液等样本的PCR。
适用范围
Ø 溶解曲线法基因分型/SNP测定；
Ø 血液、组织样本等直扩PCR；
Ø DNA荧光标记；
Ø 菌落PCR；
Ø TA克隆PCR产物添加3’-dA。
产品包装规格及组成
Component | AE0121A/ AE0122A* | AE0121B/ AE0122B* | AE0121C/ AE0122C* | AE0121D/ AE0122D* |
Taq-D DNA polymerase | 500U | 500U×5 | 2500U×4 | 2500U×10 |
10×Taq-D Buffer | 1.0 ml×1 | 1.0 ml×5 | 5.0 ml×4 | 5.0 ml×10 |
2 mM dNTPs | -/1.0 ml×1 | -/1.0 ml×5 | -/5.0 ml×4 | -/5.0 ml×10 |
*附带2mM dNTP混合物。
质量控制
相关测试表明无外源内切酶或外切脱氧核糖核酸酶污染。PCR方法检测无宿主残余DNA。
室温放置一周，扩增活性无明显改变；但强烈建议不要在室温下长期放置，用毕放回-20度。
酶贮存缓冲液
20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 100 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 0.5% Nonidet P40, 0.5% Tween 20, and 50% glycerol.
应用举例
以下反应举例为50 μl标准PCR体系， 仅供参考。实际PCR条件应根据模板、引物、目的片段大小加以优化，确定最佳反应条件。
组份 | 体积/μl | 终浓度 |
10×Taq-D Buffer | 5 | 1× |
dNTPs（2.0 mM） | 5 | 0.2 mM |
引物F（10 μM） | 1.5 | 0.3 μM |
引物R（10 μM） | 1.5 | 0.3 μM |
Template | Varable* | / |
Taq-D（5U/μl） | 0.5 | 2.5U |
ddH2O | Varable | / |
总体积 | 50 | / |
*DNA template可参照如下标准（50 μl PCR体系）：
l 人类基因组DNA | 0.1 μg-1 μg |
l λDNA | 0.5 ng-5 ng |
l 质粒DNA | 0.01 ng-1 ng |
l 大肠杆菌DNA | 10 ng-100 ng |
PCR反应条件
95℃ | 5 min | |
95℃ |
| |
55~72℃ | 20 sec | 30 Cycles |
72℃ | 1-2 kb/min | |
72℃ | 5 min |
注意事项
l 不可用于Taqman探针法q-PCR。
l 碱基出错率是指在每个碱基合成过程中所掺入的错误核苷酸数目。Taq-D DNA聚合酶的碱基错误率为1×10-5。
l 建议在冰上配置PCR 反应液后，再放入PCR仪中进行扩增。这有利于提高扩增的特异性，减少非特异性扩增，得到良好的PCR结果。
l 如进行PCR扩增后，除目的条带外，还伴随其他杂带，建议适当减少体系中的酶用量，以增加PCR扩增反应的特异性。
l 本公司Buffer经大量PCR反应实例优化而成，然而对某些PCR反应存在一个最优的镁离子浓度。若需要优化镁离子浓度，请购买本公司不含镁离子的Buffer和MgCl2/MgSO4。
警告: 本产品仅限科研实验使用，临床应用安全性和有效性未鉴定，不可用于医疗临床诊断。
