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产品说明
无机焦磷酸酶（PPase）催化无机焦磷酸盐水解生成正磷酸盐：P207–4 + H20 → 2HP04–2 。主要用于降解核酸合成反应体系中的副产物焦磷酸，从而解除副产物对核酸合成反应的抑制作用，增加合成产量。
本公司无机焦磷酸酶（大肠杆菌）是重组表达，并经多步纯化制备的重组蛋白。
活性定义
1活性单位指在37℃下，1×无机焦磷酸酶反应缓冲体系下，每分钟催化无机焦磷酸盐生成1μmol 磷酸盐所需的酶量。
活性测定条件
1×Buffer：20 mM Tris-HCl，pH 8.0，2 mM MgCl2 and 2 mM PPi。
浓度：0.2U/μl
保存条件：-20℃可保存2年，避免反复冻融
特点与适用范围
Ø 提高体外转录反应中RNA产量
Ø 增加PCR、等温核酸扩增反应的DNA合成产量
产品包装规格及组成
Component | AE0904A | AE0904B |
Ec无机焦磷酸酶 | 10U | 50U |
10×EcPPase Buffer | 0.3ml | 1.5ml |
质量控制
经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。
酶贮存缓冲液
20 mM Tris-HCl，100 mM NaCl，1 mM DTT，0.1 mM EDTA，50% Glycerol，pH 8 @ 25°C
注意事项
l 在高产量的体外RNA合成反应中，每毫升使用1-3个单位。
l 大肠杆菌PPase可以用于RPA、NASBA等温核酸扩增，酶添加量需要优化。
l 大肠杆菌无机焦磷酸酶在任何含有Mg2+（1-10 mM）的缓冲液中都能很好地发挥作用。
使用实例1：水解无机焦磷酸
1）按下表配制反应体系
反应组分 | 体积或浓度 |
10×Buffer | 10ul |
焦磷酸钠 | 2mM |
Ec无机焦磷酸酶(0.2U/µl) | 2-5ul |
H2O | Xul |
总体积 | 100ul |
2）37℃×10min反应，
3）20ul 0.1mM 柠檬酸终止反应，
4）按实验目的进行后续操作。
使用实例2：增加体外转录RNA合成量
1）按如下表格配制体外RNA转录反应液
反应组分 | ul |
10× Buffer | 5 |
NTP（10mM ATP,GTP,TTP,CTP） | 5 |
模板DNA | 1µg |
RNase Inhibitor （40U/μl） | 1 |
T7 RNA polymerase (50U/µl) | 1 |
Ec无机焦磷酸酶(0.2U/µl) | 1.0-2.0 |
DEPC -treated H2O | Variable |
总体积 | 50 |
2）按设定条件进行体外转录，结束后琼脂糖胶电泳检测RNA转录产物
警告: 本产品仅限科研实验使用，临床应用安全性和有效性未鉴定，不可用于医疗临床诊断。
注意事项
l 在高产量的体外RNA合成反应中，每毫升使用1-3个单位。
l 大肠杆菌PPase可以用于RPA、NASBA等温核酸扩增，酶添加量需要优化。
l 大肠杆菌无机焦磷酸酶在任何含有Mg2+（1-10 mM）的缓冲液中都能很好地发挥作用。
