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产品说明
无机焦磷酸酶（PPase）催化无机焦磷酸盐水解生成正磷酸盐：P207–4 + H20 → 2HP04–2 。主要用于降解核酸合成反应体系中的副产物焦磷酸，从而解除对核酸合成反应的抑制作用，增加合成产量。本酶为热稳定酶，在50-70℃均有较高活性，尤其适合于Bst DNA聚合酶催化的LAMP等温扩增实验。
本公司热稳定无机焦磷酸酶是重组表达，并经多步纯化制备的重组蛋白。
活性定义
1 单位指标准反应条件下65℃ 反应 10 分钟，每分钟催化无机焦磷酸盐生成 1 μmol 磷酸盐的酶量。
活性测定条件
1×反应体系：50mM Tris-HCl，1 mM MgCl2 和 0.32 mM PPi，pH 8.5，
浓度：1U/μl
保存条件：-20℃可保存2年，避免反复冻融
特点
Ø 本酶为热稳定酶，尤其适合于Bst DNA聚合酶催化的LAMP、CPA等温扩增，以及HDA等温扩增实验。
Ø 本酶可以用于PCR扩增反应
适用范围
Ø 增加PCR、等温核酸扩增反应的DNA合成产量
Ø 用于LAMP、RPA、HDA等温核酸扩增，增加扩增产量
Ø 提高体外转录反应中RNA产量
产品包装规格及组成
Component | AE0903A | AE0903B |
热稳定无机焦磷酸酶 | 200U | 1000U |
10×热稳定PPase Buffer | 1.0ml | 1.0ml×5 |
质量控制
经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。
酶贮存缓冲液
20 mM Tris-HCl，100 mM KCl，1 mM DTT，0.1 mM EDTA，50% Glycerol，pH 8 @ 25°C
使用实例1：水解无机焦磷酸
1）按下表配制反应体系
反应组分 | 体积或浓度 |
10×Buffer | 10ul |
焦磷酸钠 | 2mM |
酶(1U/µl) | 2-5ul |
H2O | Xul |
总体积 | 100ul |
2）65℃×10min反应，
3）20ul 0.1mM 柠檬酸终止反应，
4）按实验目的进行后续操作。
使用实例2：改善PCR扩增效果
1） 按如下表格配制PCR反应液
PCR 组份 | 体积/μl | 终浓度 |
10×Taq酶Buffer | 5 | 1× |
dNTPs（2.0 mM） | 5 | 0.2 mM |
引物F（10 μM） | 1.5 | 0.3 μM |
引物R（10 μM） | 1.5 | 0.3 μM |
Template | 1-5 | / |
Taq DNA聚合酶（5U/μl） | 0.5 | 2.5U |
热稳定无机焦磷酸酶（1U/μl） | 1.0-2.0 | 1-2U |
ddH2O | Varable | / |
总体积 | 50 | / |
2）按设定PCR条件进行PCR，结束后琼脂糖胶电泳检测PCR产物。
警告: 本产品仅限科研实验使用，临床应用安全性和有效性未鉴定，不可用于医疗临床诊断。
注意事项
l 因体外RNA合成反应、RPA等温扩增、NASBA等温扩增都是在常温下进行，因此本酶不建议应用于这3种反应。
l 本无机焦磷酸酶在任何含有Mg2+（1-10 mM）的缓冲液中都能很好地发挥作用。
