产品说明

E. coli Poly(A) 聚合酶以单链RNA作为引物，ATP作为底物进行聚合反应。即能够在没有模板的指导下，将ATP以AMP的形式添加到RNA的3’端，通常可以在3’末端加入20~200个连续的AMP，形成俗称的polyA尾巴。该3’ polyA尾巴可增强mRNA的稳定性。在本身不带polyA尾巴的RNA（例如microRNA）的3’端加上polyA尾巴，可以为cDNA合成提供oligo-dT引物结合位点等。

本公司E.coli Poly(A) polymerase是重组表达，并经多步纯化制备的重组蛋白。

活性定义

1活性单位指在37℃下，1× Poly(A) Polymerase反应缓冲体系下，10 min内将1 nmol AMP掺入16nt的ssRNA所需的酶量。

活性测定条件

50 mM Tris-HCl，250 mM NaCl，10 mM MgCl₂，加入1 mM ATP，(pH 7.9 @ 25℃)，37℃温育。

浓度：5U/μl

保存条件：-20℃可保存2年，避免反复冻融

特点与应用

Ø RNA的3’标记

Ø microRNA加polyA尾巴，为cDNA合成提供oligo-dT引物结合位点

Ø 体外转录RNA分子3’ polyA加尾，增强RNA稳定性，提高转染至细胞中RNA翻译效率

Ø 用5’三磷酸化虫草素（cordycepin 5´-triphosphate）或ATP标记RNA

Ø 为RNA添加Poly(A)尾，用于克隆或亲和纯化

产品包装规格及组成

质量控制

经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。

酶贮存缓冲液

20 mM Tris-HCl，300 mM NaCl，1 mM DTT，1 mM EDTA，50% Glycerol，0.1% (v/v) Triton® X-100，pH 7.5 @ 25°C

使用实例：

1）按下表配制反应体系

2）37℃×10min反应，

3）65℃×20min失活酶，

4）尿素变性PAGE电泳检测酶切产物，或按实验目的进行后续操作。

警告: 本产品仅限科研实验使用，临床应用安全性和有效性未鉴定，不可用于医疗临床诊断。

注意事项

l 不同的实验需要加 A 的量会有所不同，可通过减少反应时间来调整加A的长度。

l 热失活：65℃×20 min。

l 可以在反应体系中加入核酸酶抑制剂来防止RNA的降解

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