产品说明

热稳定核酸内切酶 IV 来源于嗜热细菌，为脱嘌呤/脱嘧啶（AP）位点特异性的核酸内切酶。该酶切割 AP 位点 5´ 端的第一个磷酸二酯键，产生 3´ 羟基和 5´ 脱氧核糖磷酸末端。除天然的AP位点外，各种人工合成的Spacer分子也能够被内切核酸酶IV有效切割，包括THF、Spacer C3、Spacer C12、Spacer 9，Spacer 18等。该酶也具有 3´二酯酶活性，能从 DNA 的 3´末端释放磷酸甘油醛（phosphoglycoaldehyde）、α,β-不饱和醛（α,β-unsaturated aldehydes）、3’-磷酸、其它3' blocking groups。该酶还能够作用于 DNA 分子上的几种氧化性损伤，水解氧化损伤碱基的5’端第一个磷酸二酯键。 另外，该酶还具有3´-5´的外切酶活性。酶活性受到金属离子、DTT、EDTA等的影响，优先作用于3´凹末端的双链DNA。

本公司热稳定核酸内切酶 IV是在大肠杆菌中重组表达，并亲和纯化的重组蛋白。

活性定义

1 单位指在65℃ 条件下，1小时能切割 1 pmol 含一个 AP 位点的 34 bp 荧光标记的寡核苷酸双链所需要的酶量。

AP 位点的制备方法如下：37℃条件下，用1U尿嘧啶-DNA 糖基化酶（UDG）处理 10 pmol 含一个尿嘧啶碱基的34 bp寡核苷酸双链2分钟。

活性测定：

1× AM Buffer E：10 mM KCl，20 mM Tris-HCl，10 mM (NH₄)₂SO₄，2 mM MgSO₄，0.1% Trition X-100（pH 8.8 @ 25℃），65℃ 温育。 

浓度：10U/μl

保存条件：-20℃保存

特点

Ø 具有很好的热稳定性，可以在65-75℃反应；

Ø 在多种反应体系中均有活性。

适用范围

Ø 与高温UDG一起改善高忠实性DNA聚合酶PCR扩增性能

Ø 单细胞凝胶电泳（彗星试验）；

Ø 切断合成的寡核苷酸中各种Spacer，例如，Spacer C3，Spacer C18，Spacer 9等；

Ø 修复损伤的DNA。

产品包装规格及组成

质量控制

相关测试表明无外源内切、外切脱氧核糖核酸酶、RNase污染。PCR方法检测无宿主残余DNA。

酶贮存缓冲液

20 mM Tris-HCl，150 mM NaCl，1 mM DTT，0.1 mM EDTA，50% Glycerol， pH 8.0 @ 25°C。 

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AE1103: Thermostable UDG

应用举例

1、改善PCR扩增效果

1. 按如下表格配制PCR反应液

2. PCR反应。

警告: 本产品仅限科研实验使用，临床应用安全性和有效性未鉴定，不可用于医疗临床诊断。

注意事项

l 该酶的最佳反应温度为65-70°C。该酶与PCR反应条件兼容。

l 彗星试验的推荐稀释度：1:10⁴-1:10⁵。

l Endo IV最佳缓冲液为1× AM Buffer C。该酶在AM Buffer B中的活性为100%，在AM BufferD2缓冲液中的活性为25%。不建议在AM BufferA中使用Endo IV。

l 本酶为高温酶，不能直接热失活。若需失活该酶可以进行酚氯仿抽提，或加入终浓度50mM EDTA并在95℃ 加热 20 分钟。

l 本酶有高浓度包装（200U/ul），在用于改善PCR扩增效果时建议使用高浓度包装，且每个PCR反应加入量为20-200U。

l 用于改善PCR扩增效果时，其原理如下：高温UDG切除dU碱基产生无碱基AP位点，高温内切核酸酶IV断裂AP位点，并由DNA聚合酶进行延伸，修复成全长DNA片段。

l 本酶活性随温度升高而增强，具体应用建议在不同温度下摸索酶具体用量。

l 酶稀释缓冲液: 100 mM KCl, 10 mM Tris-HCl (pH 7.4 @ 25°C), 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, 0.1% Triton X-100 and 50% glycerol.

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