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产品说明
本制品是重组表达的人源鼻病毒Rhinovirus 14编码的3C Protease。本酶是高纯度的N端6×His-GST标签蛋白质，通过镍柱或GST树脂结合方法极易从蛋白酶反应液中去除。本酶具有与天然蛋白质相同的活性，能够特异性切割氨基酸序列LeuGluValLeuPheGln↓GlyPro，可有效切断含Precission 3C Protease识别序列的融合蛋白质的标签序列。本酶在4℃仍具有活性，可在低温下操作，有利于目的蛋白质的活性和稳定性。
本公司Precission 3C protease是重组表达，并经多步纯化制备的重组蛋白。
活性定义
1活性单位指在4℃下，1× Precission 3C protease反应缓冲体系下，16 h内切割大于95%的100ug Sumo-3C-SSB融合蛋白底物所需的酶量。
活性测定条件
500 mM Tris-HCl (pH7.5，25℃)，1.5 M NaCl
浓度：2U/μl
保存条件：-20℃可保存2年，避免反复冻融
特点与适用范围
Ø 识别切断蛋白中的LEVLFQ↓GP序列，去除标签序列等
Ø 低温下活性高，有利于保持目标蛋白的稳定性和活性
Ø 具有His和GST双标签，可以方便的从反应体系中去除3C蛋白酶
产品包装规格及组成
Component | AE5104A | AE5104B | AE5104C |
Precission 3C protease | 200U | 1000U | 1000U×4 |
Precission 3C protease Buffer | 0.5ml | 1ml | 5ml |
质量控制
经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。
酶贮存缓冲液
50 mM Tris-HCl (pH8.0，25℃)，150 mM NaCl，1 mM EDTA，0.5 mM，Tris (Hydroxypropyl) Phosphine（THP)，50% Glycerol
使用实例：
反应组分 | 体积或浓度 |
10×Buffer | 5ul |
蛋白底物 | 10-20ug |
酶(2U/µl) | 1-2ul |
H2O | Xul |
总体积 | 50ul |
2） 混匀后在4-20℃下，反应2-16小时，分别在 1h、2h、4h、8h,16h后取出 20ul 样品；
3）向每个样品中加入等体积的 2×SDS 样品缓冲液，进行SDS电泳检测目标蛋白切割效果。
表 1. Buffer组成对HRV 3C Protease的影响
组份 | 活性 (%)* | 组份 | 活性 (%)* |
（1 ×HRV 3C Cleavage Buffer） | 100 | 0.5 mM DTT | 100 |
0.2 M NaCl | 100 | 1 mM DTT | 100 |
0.8 M NaCl | < 100 | 2 mM DTT | 100 |
1 mM ZnCl2 | 100 | 0.5 mM THP | 100 |
10 mM ZnCl2 | 0 | 1 mM THP | 100 |
100 mM ZnCl2 | 0 | 2 mM THP | 100 |
0.1% Triton | 100 | 0.5 mM TCEP | 100 |
1% Triton | 100 | 1 mM TCEP | 100 |
0.1% Tween 20 | 100 | 2 mM TCEP | 100 |
1% Tween 20 | 100 | 1% Glycerol | 100 |
0.1% Nonidet P40 | 100 | 5% Glycerol | < 90 |
1% Nonidet P40 | 100 | 10% Glycerol | < 90 |
1 mM PMSF | 100 | 0.5 M Urea | 0 |
5 mM PMSF | 100 | 1 M Urea | 0 |
8 mM PMSF | < 100 | 2 M Urea | 0 |
0.1 mM Leupeptin | < 100 | 0.5 M Guanidine | 0 |
0.5 mM Leupeptin | < 70 | 1 M Guanidine | 0 |
0.75 mM Leupeptin | < 70 | 2 M Guanidine | 0 |
1 mM EGTA | 100 | 0.1 M Imidazole | 0 |
20 mM EGTA | 100 | 0.2 M Imidazole | 0 |
50 mM EGTA | 100 | 0.5 M Imidazole | 0 |
1 mM EDTA | 100 | 10 mM Na Phosphate Buffer | < 90 |
20 mM EDTA | 100 | 50 mM Na Phosphate Buffer | < 90 |
50 mM EDTA | 100 | 100 mM Na Phosphate Buffer | < 90 |
*上述组份加入到1×HRV 3C Cleavage Buffer中的相对活性（定义 1×HRV 3C Cleavage Buffer中的活性为100％）
警告: 本产品仅限科研实验使用，临床应用安全性和有效性未鉴定，不可用于医疗临床诊断。
注意事项
l 在50 μl Precission 3C protease Buffer中，4℃反应16小时，1 U的Precission 3C protease能切断至少95%的测试底物蛋白。但是，由于蛋白质的初级和二级结构以及反应缓冲液不同，切断效率会有所不同，因此，需要进行预实验来确定Precission 3C protease的适宜添加量。
l Precission 3C protease可以在适合于目的蛋白质的缓冲液中进行反应（参照表1：Buffer 组成对Precission 3C protease的影响）。当使用Ni-NTA型镍柱来去除蛋白酶反应液中的标签蛋白和蛋白酶时，蛋白酶反应液中不可以含有还原剂（如：2-巯基乙醇）或螯合剂（如：EDTA），这些试剂会导致螯合金属离子的洗脱。
l 可以在4℃～37℃进行反应，但4℃是推荐的标准反应温度。
l 另外，本公司具有只带His标签的3C蛋白酶（目录编号AE5105），蛋白比活性高，且可以通过镍柱去除反应体系中的3C蛋白酶。
