产品说明

TEV protease（烟草蚀纹病毒蛋白酶；Tobacco etch virus protease）是来源于烟草蚀纹病毒（TEV）Nla的重组蛋白酶，此蛋白酶被用来切除纯化后融合蛋白的亲和标签，TEV蛋白酶具有很强的位点特异性，可特异性识别Glu-Asn-Len-Phe-Gln(Gly/Ser)氨基酸序列，并切割Gln和Gly/Ser之间的肽键。TEV蛋白酶带有多聚His标签，酶切后，可采用亲和层析的方法很容易的去除。

活性定义

在30°C条件下，反应1小时切割85%以上的3ug底物蛋白（约35kDa）所需的酶量定义为1个活性单位。

活性测定条件

50mM Tris-HCL(pH7.8)，0.5mM EDTA，0.5mM DTT，30°C温育1h。

浓度：1U/μl

保存条件： -20°C

特点

Ø  在广泛的pH值和4-37度温度范围内都有较强活性，建议用最适条件切割；

Ø  具有很强的位点特异性；

Ø  带有多聚His标签，酶切后，可采用亲和层析的方法去除。

适用范围

Ø  在TEV蛋白酶的识别位点切断肽键，将目的蛋白肽段从融合蛋白中回收

产品包装规格及组成

质量控制

在质量控制实验中，该蛋白酶未检测到非特异性蛋白酶活性。

酶贮存缓冲液

50mM Tris-HCl， 1mM EDTA，5mM DTT  ，0.1% TritonX-100，50%glycerol（pH7.5）

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应用举例

1. 按如下表格配制反应液

2. 混匀后在30℃条件下温育，分别在1h、2h、4h、6h后取出20μl样品

3. 向每个样品中加入等体积的2×SDS蛋白上样缓冲液。在-20℃保存，直到实验完成。

4. 取酶切前后样品进行SDS-PAGE检测分析，确定TEV蛋白酶的酶切效率。

警告: 本产品仅限科研实验使用，临床应用安全性和有效性未鉴定，不可用于医疗临床诊断。

注意事项

l  注意TEV蛋白酶60°C×10min热失活，避免温度过高导致TEV蛋白失活

l  TEV蛋白酶裂解位点的最佳序列为ENLYFQG/S。最后一位氨基酸为A、M、C也可以切割，NLF这三个残基换成其它残基也会低效切割。

l  >2 M尿素，>0.5 M盐酸胍，>50 mM咪唑，6>pH>9，半胱氨酸蛋白酶抑制剂极大抑制酶活

l  高浓度TEV蛋白酶也不会发生非特异性蛋白切割水解

l  可以按线性比例放大反应体积。

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