产品说明

外切核酸酶III作用于双链 DNA，从 3´ OH 末端方向逐步切去单核苷酸。每次酶与底物结合催化，只有几个核苷酸被除掉，从而在 DNA 分子群内产生渐进式3’端缺失。

尽管可以作用于双链 DNA 的切刻产生单链缺口，但该酶最适底物是平齐末端或 3´ 凹陷末端 DNA。由于对单链 DNA 无活性，因此该酶无法切割 3´ 突出末端。3´ →5´ 外切酶活性对底物的切割程度随 3´ 突出末端的长度而变化，四碱基或更长的突出末端完全不能被切割。

核酸外切酶 III 的活性部分依赖DNA双螺旋结构，并根据序列的不同而有差异（C＞A=T＞G）。温度、盐浓度和酶与 DNA的比例对酶活性影响很大，应根据不同的反应调整反应条件。

核酸外切酶 III 也有 RNase H、3´ -磷酸酶、脱嘌呤/嘧啶（AP）位点特异性核酸内切酶活性。 

本公司Exonuclease III是重组表达，并经多步纯化制备的重组蛋白。

活性定义

1活性单位指在37℃条件下， 30 min内催化生成1nmol酸可溶性总核苷酸所需的酶量。

活性测定条件

1×AM BufferA: 10 mM Bis-Tris，10 mM MgCl₂，1 mM DTT（pH 7.0）

浓度：100U/μl

保存条件：-20℃可保存2年，避免反复冻融

特点与适用范围

Ø  3´ →5´ 外切酶活性

Ø  双链DNA的非定向巢式缺失

Ø  RPA扩增中荧光探针的降解，释放荧光信号

Ø  制备用于双脱氧测序的单链模板

产品包装规格及组成

质量控制

经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。

酶贮存缓冲液

200 mM KCl，5 mM KPO₄，5 mM β-ME，0.05 mM EDTA，200 µg/ml BSA，50% Glycerol (pH 6.5@25℃)。

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AE2101:  lambda exonuclease

应用实例

1.        酶切反应

1）按下表配制反应体系

2）37°C反应30min；

3）75°C加热10min，使酶失活

4）电泳检测双链DNA水解结果。

2.        RPA荧光释放反应

1）按下表配制反应体系

2）在荧光检测仪（qPCR仪）中37°C反应15-60min；

3）观测荧光曲线。

警告: 本产品仅限科研实验使用，临床应用安全性和有效性未鉴定，不可用于医疗临床诊断。

注意事项

l  核酸外切酶 III 不能切割硫代磷酸酯键。因此，也可以通过引入一个 α-硫代磷酸核苷酸将 DNA 分子的一端保护起来，以进行单向切割。 

l  这种特性可以用于对一端为钝化末端（3´ 突出端），另一端是敏感末端（平端或 5´ 突出端）的线性 DNA 分子进行单方向切割。

l  在如下Buffer中的活性为：AM Buffer 1：100%，AM Buffer 2：75%，AM Buffer 3：25%，AM Buffer 4：75%，AM Buffer 4.1：100%

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