产品说明

Lambda 核酸外切酶来源于lambda噬菌体，作用于双链 DNA，沿 5´→3´ 方向逐步切去 5´ 单核苷酸。最适底物是 5´ 磷酸化的双链 DNA，也能缓慢降解单链 DNA 和非磷酸化双链DNA底物。降解非磷酸化双链DNA，单链DNA底物的效率分别只有磷酸化双链DNA的5%、1%。该酶不能从 DNA 的切刻或缺口处起始消化。

本公司lambda exonuclease是重组表达，并经多步纯化制备的重组蛋白。

活性定义

1活性单位指在37℃下，1× lambda exonuclease反应缓冲体系下，30 min内从5’ 磷酸化的双链DNA中水解产生10 nmol 酸可溶性脱氧核糖核苷酸所需的酶量。

活性测定条件

1× lambda exonuclease：67 mM Glycine-KOH ，2.5 mM MgCl₂ ，50 µg/ml BSA (pH 9.4 @ 25°C)

浓度：5U/μl

保存条件：-20℃可保存2年，避免反复冻融

特点

Ø  高效的DNA特异性5’→3’ 核酸外切酶活性

Ø  底物偏好性：5’P双链DNA > 5’OH 双链DNA >> 单链DNA

适用范围

Ø  从5’ 端高效降解平末端或带缺口的双链DNA，生成单链DNA

Ø  优选底物是5’ -磷酸化的双链DNA。

产品包装规格及组成

质量控制

经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。

酶贮存缓冲液

25 mM Tris-HCl ，50 mM NaCl ，1 mM DTT ，0.1 mM EDTA ，50% Glycerol ，pH 8 @ 25°C

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AE2102:  Exonuclease III

应用实例

1.        单链DNA制备

1）按下表配制反应体系

2) 37°C反应30min；

3) 75°C加热10min，使酶失活；

4) 电泳检测DNA消化程度。

*若只有1条链为5’磷酸化修饰的线性双链DNA，则水解产物主要为单链DNA，可以用来制备单链DNA。若2条链都是5’磷酸化修饰的线性双链DNA，则水解产物主要为单核苷酸，即DNA完全水解。

警告: 本产品仅限科研实验使用，临床应用安全性和有效性未鉴定，不可用于医疗临床诊断。

注意事项

l  若底物为只有1条链为5’磷酸化修饰的线性双链DNA，则水解产物主要为单链DNA，可以用来制备单链DNA；若底物为两条链都是5’磷酸化修饰的线性双链DNA，则水解产物主要为单核苷酸，即DNA完全水解。

l  Lambda外切核酸酶在各种缓冲液中的活性：

AM Buffer A 15％；AM Buffer B 40％；AM Buffer C 10％；AM Buffer D 40％；AM Buffer D2 50％；核酸外切酶I反应缓冲液 100％；Thermopol反应缓冲液 100％

l  5’ -OH末端的消化速度比5’ -P末端慢20倍。ssDNA的消化速度比dsDNA慢100倍。

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