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产品说明
mRNA Cap 2'-O- Methyltransferase能在 RNA紧邻 5´ 末端帽结构的第一个核苷酸的 2´ -OH上添加甲基基团。利用 S-腺苷甲硫氨酸（SAM）作为甲基供体，使带帽 RNA的cap-O甲基化为 Cap-1。研究表明Cap-1结构的2’-O-甲基化可以使mRNA逃逸某些真核细胞的免疫反应。
mRNA Cap 2´-O-Methyltransferase只能将5’末端带有m7GpppN 帽结构的RNA进行甲基化修饰，不能够将5’端为pN, ppN, pppN or GpppN的RNA甲基化. m7GpppN 帽结构的RNA可以通过在体外转录反应中添加帽类似物，或体外加冒系统添加帽结构。2kU的mRNA Cap 2'-O- Methyltransferase可以甲基化400 μg的带帽 RNA.
本公司mRNA Cap 2'-0- Methyltransferase是重组表达，并经多步纯化制备的重组蛋白。
活性定义
1活性单位指在37℃下， 1×mRNA Cap 2'-0- Methyltransferase反应缓冲体系下，60 min内将10 pmol 80 nt 的带帽 RNA 转录子甲基化所需的酶量。
活性测定条件
50 mM Tris-HCl (pH 8.0)，5 mM KCl，1 mM DTT，1 mM MgCl2，37℃ 温育。
浓度：50U/μl
保存条件：-20℃可保存2年，避免反复冻融
特点与用途
Ø 改善 mRNA 在显微注射和转染后的表达
Ø 提高 RNA 的翻译效率
产品包装规格及组成
Component | AE0908A | AE0908B |
mRNA Cap 2'-0- MTase | 2kU | 10kU |
mRNA Cap 2'-0- MTase Buffer | 0.2ml | 1.0ml |
DEPC处理H2O | 1.0ml | 5.0ml |
质量控制
经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。
酶贮存缓冲液
20 mM Tris-HCl, 100 mM NaCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 0.1% (w/v) Triton® X-100, 50% Glycerol, pH 8 @ 25°C
使用实例：
1）按下表配制反应体系(可以甲基化10 µg的5’带帽RNA)
反应组分 | 体积或浓度 |
10×Buffer | 2 µl |
2'-O- Methyltransferase (50U/µl) | 1 µl |
核酸酶抑制剂（40U/ul） | 0.5 µl |
变性的Cap 2'-OH mRNA# | X µl |
SAM (4 mM) | 1 µl |
DEPC处理H2O | Y µl |
总体积 | 20 µl |
2）37℃×60min反应，
3）75℃×15min失活酶，
4）按实验目的进行后续操作。
注意事项：
1、变性Cap 2'-OH mRNA的制备方法如下：
1) 将5’帽状结构RNA溶于无核酸酶的去离子水，总体积16 ul；
2) 65度加热5min；
3) 冰上放置5min。
2、长度短于200nt的RNA，建议反应时间延长到2小时。
3、如后续试验需要，可以对甲基化的RNA进行纯化。
警告: 本产品仅限科研实验使用，临床应用安全性和有效性未鉴定，不可用于医疗临床诊断。
注意事项
l 只能甲基化带5’ m7GpppN帽结构的RNA
l 可以在反应体系中加入核酸酶抑制剂来防止RNA的降解
l 为了提高2’-O-甲基化RNA的后续应用效果，可以对甲基化修饰的RNA进行纯化。
