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产品说明
RNase HIII 是一种内切核糖核酸酶，与RNase HII类似，特异性切割DNA双链中RNA碱基5’端的磷酸二酯键，产生切口，产生5’磷酸和3’羟基末端。RNaseHII还将沿着冈崎片段的RNA部分切割多个位点（即RNase H 活性）。该酶不水解纯DNA链、单链RNA。RNase HIII 偏好Mn2+离子，RNase HII偏好Mg2+离子。
本公司RNase HIII是重组表达，并经多步纯化制备的重组蛋白。
活性定义
在37°C，1× AM Buffer E缓冲液中，30分钟内切断100pmole含有单个核糖核苷酸的双链DNA底物所需酶量。
活性测定条件
AM Buffer E ，37℃温育。
浓度：5U/μl
保存条件：-20℃
特点
Ø 偏好Mn2+离子
Ø 同时具有RNase H活性
适用范围
Ø 切割含有核糖核苷酸的双链DNA
Ø 当与T7 Endo I一起使用时，在掺入的核糖核苷酸的位点产生双链断裂
Ø 冈崎氏片段RNA部分的降解
产品包装规格及组成
Component | AE2355A | AE2355B |
RNase HIII | 200U | 1000U |
10× AM Buffer E （Polymerase Buffer） | 0.2ml | 1.0ml |
质量控制
相关测试表明无外源内切、外切脱氧核糖核酸酶、RNase污染。PCR方法检测无宿主残余DNA。
酶贮存缓冲液
20mM Tris-HCl，100 mM NaCl，1 mM DTT ，0.1 mM EDTA ，50% Glycerol，pH 7.5@ 25°C。
应用实例
1、RT-PCR去除RNA/DNA杂合双链的RNA链
1）按下表配制反应体系
反应组分 | 体积/ul |
10× PCR Buffer | 5 |
Primer-F（10uM） | 2 |
Primer-R（10uM） | 2 |
dNTP（2mM） | 5 |
RT反转录产物 | 100-200ng |
RNase HIII (5U/ul) | 1 |
Taq DNA聚合酶 (5U/ul) | 2.5U |
H2O | Variable |
总体积 | 50 |
2) 37°C反应5-10min；
3) PCR反应。
4) 琼脂糖电泳检测DNA，或进行后续实验
2、dsDNA中单一核糖的切割
1）按下表配制反应体系
反应组分 | 体积/ul |
10× Buffer | 2 |
含单一RNA碱基的dsDNA | 10-50pmole |
RNase HIII (5U/ul) | 1 |
H2O | Variable |
总体积 | 20 |
2) 37°C反应15-30min；
3) 8M尿素变性PAGE电泳检测dsDNA切割结果，或进行后续实验
3、与T7 Endo I一起在dsDNA核糖核苷酸的位点产生双链断裂
1）按下表配制反应体系
反应组分 | 体积/ul |
10× Buffer | 3 |
含单一RNA碱基的dsDNA | 10-50pmole |
T7 endo I (10U/ul) | 1 |
RNase HIII (5U/ul) | 1 |
H2O | Variable |
总体积 | 30 |
2) 37°C反应15-30min；
3) 8M尿素变性PAGE电泳检测dsDNA切割结果，或进行后续实验
警告: 本产品仅限科研实验使用，临床应用安全性和有效性未鉴定，不可用于医疗临床诊断。
注意事项
l 与RNaseH相比，RNaseHIII表现出较低的RNase H活性
l 冈崎片段优先在RNA/DNA序列交界处的核糖核酸处产生5’缺口
l 与RNase HII偏好Mg2+离子不同，RNase HIII 偏好Mn2+离子
l 与RNA/DNA杂化底物或冈崎片段相比，RNase HIII更喜欢含有单个核苷酸的dsDNA双链
