咨询热线：
400-660-9586
产品说明
RNase HII 是一种内切核糖核酸酶，在DNA双链的背景下，它优先将5‘端剪断到一个核糖核酸上。该酶留下5’磷酸和3’羟基末端。RNase HII还将沿着冈崎片段的RNA部分切割多个位点。
本公司RNase HII是重组表达，并经多步纯化制备的重组蛋白。
活性定义
37℃、1× AM BufferB反应缓冲体系下，30 min内切断100 pmole含有单个核糖核苷酸的合成双链DNA所需的酶量。
活性测定条件
AM BufferB，100ug/ml BSA，37℃温育。
浓度：5U/μl
保存条件：-20℃可保存2年，避免反复冻融
特点与适用范围
Ø 切割含有核糖核苷酸的dsDNA产物
Ø 当与T7 Endo I一起使用时，在掺入的核糖核苷酸的位点产生双链断裂
Ø 冈崎片段RNA部分的降解
产品包装规格及组成
Component | AE2354A | AE2354B |
RNase HII | 250U | 1250U |
10× AM BufferB | 0.3ml | 1.5ml |
质量控制
经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。
酶贮存缓冲液
20mM Tris-HCl，100 mM NaCl，1 mM DTT，0.1 mM EDTA，50% Glycerol，pH 7.5@ 25°C。
应用实例
1、RT-PCR去除RNA/DNA杂合双链的RNA链
1）按下表配制反应体系
反应组分 | 体积/ul |
10× PCR Buffer | 5 |
Primer-F（10uM） | 2 |
Primer-R（10uM） | 2 |
dNTP（2mM） | 5 |
RT反转录产物 | 100-200ng |
EcRNase HII (5U/ul) | 1 |
Taq DNA聚合酶 (5U/ul) | 0.5 |
H2O | Variable |
总体积 | 50 |
2) 37°C反应5-10min；
3) PCR反应。
4) 琼脂糖电泳检测DNA，或进行后续实验
2、dsDNA中单一核糖的切割
1）按下表配制反应体系
反应组分 | 体积/ul |
10× Buffer | 2 |
含单一RNA碱基的dsDNA | 10-50pmole |
EcRNase HII (5U/ul) | 1 |
H2O | Variable |
总体积 | 20 |
2) 37°C反应15-30min；
3) 8M尿素变性PAGE电泳检测dsDNA切割结果，或进行后续实验
3、与T7 Endo I一起在dsDNA核糖核苷酸的位点产生双链断裂
1）按下表配制反应体系
反应组分 | 体积/ul |
10× Buffer | 3 |
含单一RNA碱基的dsDNA | 10-50pmole |
T7 endo I (10U/ul) | 1 |
EcRNase HII (5U/ul) | 1 |
H2O | Variable |
总体积 | 30 |
2) 37°C反应15-30min；
3) 8M尿素变性PAGE电泳检测dsDNA切割结果，或进行后续实验
警告: 本产品仅限科研实验使用，临床应用安全性和有效性未鉴定，不可用于医疗临床诊断。
注意事项
l 与RNaseH相比，RNaseHII表现出较低的RNA/DNA杂交链内切酶活性
l 冈崎片段优先在RNA/DNA序列交界处的核糖核酸处产生5’缺口
l 与RNA/DNA杂交底物或Okazaki片段相比，RNaseHII更喜欢含有单个核苷酸的双链DNA
l 0.1%SDS孵育足以灭活核糖核酸酶HII。
