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产品说明
Tth RNase H 特异性识别并切割RNA-DNA杂交体中RNA序列的磷酸二酯键，同时保持DNA序列完整。这种热稳定的核酸酶具有与大肠杆菌RNase H相同的酶学性质，但在更高的温度下具有活性，最适活性在60 -70°C。这些特性允许在需要更高的检测温度的应用中使用。适合于cDNA第二链合成时除去 mRNA ；以及一步法RT-PCR中去除mRNA链，生成cDNA单链，提高cDNA与引物的配对效果，改善RT-PCR效果。
本公司Tth RNase H是重组表达，并经多步纯化制备的重组蛋白。
活性定义
1单位指在温度为50℃，1× Tth RNase H 反应缓冲体系的条件下，20min内水解40 pmol荧光标记的25 bp RNA-DNA杂交链成1 nmol核苷酸所需的酶量。
活性测定条件
50 mM Tris-HCl，75 mM KCl，3 mM MgCl2，10 mM DTT (pH 8.3 @ 25℃)， ≥50°C温育。
浓度：10U/μl
保存条件：-20℃保存
特点
Ø 不消化单链RNA、单链或双链DNA
Ø 高温酶35-75℃都有活性，活性随温度升高而增加，推荐温度为50-65℃
适用范围
Ø cDNA第二链合成时除去 mRNA
Ø RT-PCR去除RNA/DNA杂合双链的RNA链，提高PCR效果
Ø RT-LAMP、RT-RPA等恒温扩增中去除RNA/DNA杂合链的RNA链，提高恒温扩增效果
Ø 杂交到 Oligo(dT) 上的mRNA poly(A)尾的去除
Ø 高严谨度的RNA结构图谱制备和RNA 位点特异性切割
产品包装规格及组成
Component | AE2352A | AE2352B |
Tth RNase H | 250U | 1250U |
10× Tth RNase H Buffer | 0.2ml | 1.0ml |
质量控制
相关测试表明无外源内切、外切脱氧核糖核酸酶、RNase污染。PCR方法检测无宿主残余DNA。
酶贮存缓冲液
50mM Tris-HCl，1 M NaCl，1 mM DTT ，0.1 mM EDTA ，0.1 mM Triton® X-100 ，50% Glycerol，pH 7.5@ 25°C。
应用实例
1、RT-PCR去除RNA/DNA杂合双链的RNA链
1）按下表配制反应体系
反应组分 | 体积/ul |
10× PCR Buffer | 5 |
Primer-F（10uM） | 2 |
Primer-R（10uM） | 2 |
dNTP（2mM） | 5 |
RT反转录产物 | 100-200ng |
Tth RNase H | 1 |
Taq DNA聚合酶(5U/ul) | 0.5 |
H2O | Variable |
总体积 | 50 |
2) 65°C反应5-10min；
3) PCR反应。
4) 琼脂糖电泳检测DNA，或进行后续实验
2、cDNA第二链合成时除去 mRNA
1）按下表配制反应体系
反应组分 | 体积/ul |
10× Buffer | 5 |
Primer-F（10uM） | 2 |
dNTP（2mM） | 5 |
RT反转录产物 | 100-200ng |
Tth RNase H | 1 |
Pfu DNA聚合酶(2U/ul) | 0.5 |
H2O | Variable |
总体积 | 50 |
2) 50-65°C反应15-30min；
3) 琼脂糖电泳检测DNA，或进行后续实验
警告: 本产品仅限科研实验使用，临床应用安全性和有效性未鉴定，不可用于医疗临床诊断。
注意事项
l RNase H活性不受核酸酶抑制剂蛋白的抑制
l 高温酶，与PCR酶的反应温度兼容匹配
l 蛋白酶K处理或添加过量EDTA使其失活
