T4 RNA连接酶2，截短型KQ（T4 Rnl2tr KQ）能特异性将5´末端预腺苷化的DNA或RNA连接到RNA的3´OH末端。反应无需ATP，但需预腺苷化接头。

T4 Rnl2tr KQ是T4 RNA连接酶2，截短型的双点突变体。 K227的突变降低了赖氨酰腺苷化。由于降低了T4 Rnl2tr从接头将腺苷基团转移到RNA 5´磷酸基的活性，K227Q可以减少T4 Rnl2tr 非特异性的连接（串联体和环）。在T4 Rnl2tr K227Q中进一步突变R55K，提高了酶的连接活性，使其与野生型T4 Rnl2tr连接活性水平一致。
   因为不再使用ATP，而改用预腺苷化接头，同时降低赖氨酰腺苷化酶的活性，所以连接反应的背景可以降至最低。该酶已用于二代测序 Small RNA的文库构建中，优化了接头的连接过程。

本公司T4 RNA 连接酶2，截短型KQ是重组表达，并经多步纯化制备的重组蛋白。

活性定义

200活性单位指在25℃，1×T4 RNA连接酶反应缓冲体系（20ul），60 min内将80%的31-mer RNA（5´-FAM-rArGrUrCrGrUrArGrCrCrUrUrUrArUrCrCrGrArGrArUrUrCrArGrCrArArUrA-3´ ）连接到预腺苷化的miRNA通用克隆接头17-mer DNA（5´-rAppCTGTAGGCACCATCAAT–NH2-3´，14μM）末端所需的酶量。

活性测定条件

1× T4 RNA连接酶2反应缓冲液：50 mM Tris-HCl (pH7.5 @ 25℃)，10 mM MgCl₂，1 mM DTT，10% (w/v) PEG 8000, 20 pmol of 5´-FAM-RNA, 40 pmol 预腺苷化DNA，25℃温育60min。

浓度：200U/μl

保存条件：-20℃可保存2年，避免反复冻融

特点与适用范围

Ø  将预腺苷化的DNA或RNA序列标签连接到任何RNA 3´末端

Ø  将单链腺苷化引物连接至小RNA上，用于cDNA文库构建

Ø  将单链腺苷化引物连接至RNA上，用于链特异cDNA文库构建 

产品包装规格及组成

质量控制

相关测试表明无外源单链和双链 DNA 核酸内切酶、外切酶、 RNase 以及磷酸酶的污染。PCR方法检测无宿主残余DNA。

酶贮存缓冲液

10 mM Tris-HCl，100 mM NaCl，1 mM DTT，0.1 mM EDTA，50% Glycerol，pH 7.5 @ 25°C

使用实例：3´ OH of RNA和5´预腺苷化DNA linker连接反应

1）按下表配制反应体系

2）25℃×1-2h反应，

3）添加蛋白酶K或终浓度20mM EDTA失活酶，

4）尿素变性PAGE电泳检测酶切产物，或按实验目的进行后续操作。

* 为了提高连接效率，PEG8000 浓度可以高达25%

警告: 本产品仅限科研实验使用，临床应用安全性和有效性未鉴定，不可用于医疗临床诊断。

注意事项

l  热失活：65℃温育20分钟。

l  可加入核酸酶抑制剂防止RNA污染。

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