ssDNA/RNA 环化连接酶为热稳定的DNA/RNA连接酶，不依赖于ATP，可催化单链DNA或单链RNA的环化，也可催化其分子间连接，但其对单链DNA的连接效率更高。环化反应中，要求催化底物单链DNA/RNA具有5’-磷酸基团和3’-OH基团。对于大于15nt的单链底物，该酶都能高效的连接。该酶还可催化DNA或RNA分子与预腺苷化的DNA接头之间的连接，另外，在ATP过量的情况下，该酶可使DNA/RNA分子腺苷化。

本公司ssDNA/RNA环化连接酶是重组表达，并经多步纯化制备的重组蛋白。

活性定义

1个活性单位为60°C下1小时内催化1pmol 5’-磷酸化Oligo (55mer)完全环化所需的酶量。

活性测定条件

30mM Tris-acetate (pH 7.5), 60mM potassium acetate, 1mM DTT，65℃温育。

浓度：100U/ul

保存条件：-20℃可保存2年，避免反复冻融

特点与应用

产品包装规格及组成

质量控制

经过严格的质控检测，无单链DNA核酸外切酶、核酸内切酶、RNase和磷酸酶污染。

酶贮存缓冲液

20 mM Tris-HCl, pH 8, 50 mM KCl, 1 mM DTT and 0.1 mM EDTA, 50% glycerol.

使用实例：

1）按下表配制反应体系

2）65℃×60min反应，

3）加入1 µl Proteinase K, 37°C温育15min，或85°C加热10min失活酶，或加入10mM EDTA终止反应。Proteinase K 有助于释放被连接酶结合的RNA。

4）尿素变性PAGE电泳检测连接产物，或按实验目的进行后续操作。

经典环化结果（50nt ssDNA）如下

泳道1为未加环化酶，2为加入环化酶，3为环化产物加入ExoI酶消化产物。

警告: 本产品仅限科研实验使用，临床应用安全性和有效性未鉴定，不可用于医疗临床诊断。

注意事项

l  添加终浓度20-50μM的ATP可提高环化效率（ATP终浓度高于 20μM 以上时会极大抑制环化效率，甚至导致环化失败），高于1mM ATP浓度会抑制连接反应。

l  对于单链DNA产物的连接，需要加入终浓度2.5mM MnCl2。

l  5’端未磷酸化的底物不能用于连接，3’端无-OH的底物不能用于连接。即环化底物 ssDNA 或 RNA 必须带有 5’磷酸基团，3’端含有 OH。

l  对于含有二级或复杂结构的连接底物，可加入0.4~0.8 M Betain以提高连接效率。不过本公司结果表明Betain没有提升连接效率。

l  该酶对底物碱基具有选择性，5’末端连接效率: G > A >>> T (U)>>> C，3’末端连接效率T(U) > A > G，当3’端的碱基为C时不能用于连接，几乎无连接产物。

l  本酶对 ssDNA 和 RNA 的环化效率极高，多数情况下， 90%以上的底物被环化。未被环化的 ssDNA 可通过加入 5U 本公司Exonuclease I（AE2202），37°C 消化 15min 去除，以获得高纯度的环化 ssDNA。未环化的 ssRNA，可利用本公司的RNase R去除。

l  对于连接底物量较少的实验来讲，推荐缩小体系，而不是减少酶的用量。在小体系实验时注意体系的蒸发，可加入矿物油以防止蒸发。

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