产品说明

DNA 连接酶催化双链 DNA 中 5’-磷基和 3’-羟基之间形成磷酸二酯键的 DNA 连接酶，以 NAD⁺ 为辅酶，作为反应的能量来源。只有当寡核苷酸与互补的靶 DNA 完美配对，并且它们之间没有间隙时，才会发生连接。对单链 DNA 或 RNA 和平末端 DNA 不具有活性。因此，可以检测单碱基突变。高热稳定性允许用高密度杂交条件进行连接，在高特异性和严格性下进行 SNPs 的精准检测。

本公司Tth DNA Ligase是重组表达，并经多步纯化制备的重组蛋白。

活性定义

在 20 μl 反应体系中，45℃ 条件下，15 分钟内能使 50% 的 1 μg 经 BstEII 消化的 λ DNA 片段

（12 bp 粘性末端，相当于 0.0338pmole）发生连接所需要的酶量定义为 1 个活性单位。

活性测定条件

20 mM Tris-HCl(pH 7.6) , 25 mM Potassium Acetate , 10 mM Magnesium Acetate , 1 mM NAD+, 10 mM DTT , 0.1% TritonX-10，45℃反应。

浓度：40U/μl

保存条件：-20℃。

特点

Ø  耐热性好；

Ø  可在高温条件下连接DNA链上的切刻位点。

应用范围：

Ø   连接酶链式反应（ligase chain reaction, LCR）反应中连接磷酸化寡核苷酸

Ø   连接酶链式反应检测等位基因特异性

产品包装规格及组成

质量控制

经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。

酶贮存缓冲液

20 mM Tris-HCl (pH8.0), 150 mM NaCl, 1 mM DTT, 50%(v/v) glycerol.

相关产品

AE1308: Taq DNA ligase，AE1310: 9°N DNA ligase，AE1307: Pfu DNA ligase

应用实例

1. DNA连接反应

1）按下表配制反应体系

2) 45°C连接15min

3）对于较长的双链DNA底物，琼脂糖电泳检测连接产物；对于短于100bp的短片段DNA，聚丙烯酰胺凝胶电泳检测连接产物。

警告: 本产品仅限科研实验使用，临床应用安全性和有效性未鉴定，不可用于医疗临床诊断。

注意事项

l  Taq DNA Ligase 不能代替 T4 DNA Ligase，本公司有售T4 DNA连接酶（AE1301）

l  长时间储存（>30 天），请存放在-80°C。

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