产品说明

高盐型 DNA 连接酶除了具有 DNA 连接酶的其它特点外，具有耐受高浓度盐的特性。可以催化双链 DNA 中 5’-磷基和 3’-羟基之间形成磷酸二酯键的 DNA 连接酶，以 NAD⁺为辅酶，作为反应的能量来源。只有当寡核苷酸与互补的靶 DNA 完美配对，并且它们之间没有间隙时，才会发生连接。相比其它 DNA 连接酶，该酶在高盐浓度下活性更高（配备了 2×buffer，用于增加盐浓度，提高活性）。

本公司高盐型 DNA 连接酶是重组表达，并经多步纯化制备的重组蛋白。

活性定义

在 20 μl 反应体系中，37℃ 条件下，15 分钟内能使 50% 的 1 μg 经 BstEII 消化的 λ DNA 片段

（12 bp 粘性末端，相当于 0.0338pmole）发生连接所需要的酶量定义为 1 个活性单位。

活性测定条件

20 mM Tris-HCl(pH 7.6) , 2.4M KCl，25 mM Potassium Acetate , 10 mM Magnesium Acetate , 1 mM NAD+ , 10 mM DTT , 0.1% TritonX-100，45℃温育。

浓度：40U/μl

保存条件：-20℃。

特点

Ø  耐热性好；

Ø  耐受高浓度 KCl

应用范围：

Ø   DNA 连接反应

Ø   SNP 检测

Ø   可在超高KCl浓度下连接DNA链上的切刻位点

产品包装规格及组成

酶贮存缓冲液

20 mM Tris-HCl (pH8.0), 150 mM NaCl, 1 mM DTT, 50% glycerol.

相关产品

AE1307: Pfu DNA ligase；AE1308: Taq DNA ligase，AE1310: 9°N DNA ligase

应用实例

1. DNA连接反应

1）按下表配制反应体系

2）37°C连接15min

3）对于较长的双链DNA底物，琼脂糖电泳检测连接产物；对于短于100bp的短片段DNA，聚丙烯酰胺凝胶电泳检测连接产物。

警告: 本产品仅限科研实验使用，临床应用安全性和有效性未鉴定，不可用于医疗临床诊断。

注意事项

l  本DNA Ligase 耐受超高浓度KCl，高达2M KCl下仍具有很高活性

l  该酶低盐浓度下活性较低，建议KCl浓度不低于1M，最好在1.5-2.5M。

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