产品说明

产品说明

在相邻DNA链的5´-磷酸末端和3´-羟基末端形成磷酸二酯键。该DNA连接反应只有当两条寡核苷酸链与互补靶DNA完全配对，并且两条寡核苷酸链之间没有空隙的条件下才可发生。对单链 DNA 或 RNA 和平末端 DNA 不具有活性。因此，可以用它来检测单碱基突变。Taq DNA 连接酶以NAD⁺为辅因子。在37-75℃范围内，Taq DNA连接酶均有活性。。高热稳定性允许用高密度杂交条件进行连接，在高特异性和严格性下进行 SNPs 的精准检测。

本公司Taq DNA ligase是重组表达，并经多步纯化制备的重组蛋白。

活性定义

1活性单位指在45℃下， 1× Taq DNA ligase反应缓冲体系下，15 min内能使 50% 的 1 μg 经 BstEII 消化的 λDNA 片段（12 bp 粘性末端）发生连接所需要的酶量。

活性测定条件

20 mM Tris-HCl，25 mM KAc，10 mM Mg(Ac)₂，10 mM DTT，1 mM NAD 和 0.1% Triton X-100（pH 7.6 @ 25℃），45℃ 温育。

浓度：40U/μl

保存条件：-20℃可保存2年，避免反复冻融

特点与适用范围

Ø 耐热性好

Ø 用于 Gibson 组装方法 

Ø dsDNA 切刻连接修复

Ø 可用连接酶链式反应（ligase chain reaction, LCR）、连接酶检测反应，检测等位基因特异性

产品包装规格及组成

质量控制

经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。

酶贮存缓冲液

10 mM Tris-HCl，50 mM KCl，1 mM DTT，0.1 mM EDTA，200 µg/ml BSA，50% Glycerol，pH 7.4 @ 25°C

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应用实例

1. 连接反应

1）按下表配制反应体系

2）45-50°C连接15min

3）对于较长的双链DNA底物，琼脂糖电泳检测连接产物；对于短于100bp的短片段DNA，聚丙烯酰胺凝胶电泳检测连接产物。

警告: 本产品仅限科研实验使用，临床应用安全性和有效性未鉴定，不可用于医疗临床诊断。

注意事项

l Taq DNA 连接酶可以有效连接 12 bp 的互补片段，但无法连接 4 bp 的互补片段（典型限制酶消化产物）。

l 反应条件：将DNA和酶在45℃的1× Taq DNA连接酶缓冲液中或在热循环仪中孵育15分钟，用50％甘油，50 mM EDTA，溴酚蓝的混合物终止反应。

l 1× Taq DNA连接酶反应缓冲液需要NAD ⁺作为辅助因子。NAD ⁺在10× Taq DNA连接酶反应缓冲液中提供；缓冲液应储存在-80°C下以延长NAD ⁺辅因子的半衰期。

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