产品说明

Pfu DNA Ligase 来源于嗜热微生物，以 ATP 为辅酶，在 45℃~80℃催化双链 DNA 相邻 5’ -磷酸和 3’ -羟基端的连接。由于具有较高的耐热性，允许较高的反应温度，从而提高了 LCR（连接酶链式反应）的忠实性。Pfu DNA 连接酶比 Taq DNA 连接酶具有更高的连接特异性，非常适合于检测单核苷酸多态性（SNP），例如药物基因组学的基因分型指导用药。

本公司Pfu DNA Ligase是重组表达，并经多步纯化制备的重组蛋白。

活性定义

在 20 μl反应体系中，45℃条件下，15分钟内使 50%经BstEII消化的 1 μg λ DNA片段（12 bp 粘性末端，相当于约 0.0338pmole）发生连接所需要的酶量，定义为 1 个活性单位。

活性测定条件

在 20 mM Tris-HCl (pH 7.5), 10 mM MgCl₂, 1 mM DTT, 1 mM ATP, 0.1% Tween 20, 0.1 mg/ml BSA 中，45℃反应 15min。

浓度：40U/μl

保存条件：-20℃。

特点

Ø 耐热性好，兼容 连接酶链式反应（ligase chain reaction, LCR）模板预变性步骤；

Ø 忠实性极高，缺口处错配碱基对不会被连接

Ø 可在高温条件下连接DNA链上的切刻位点。

Ø 与常温 DNA 连接酶相比，具有更高的连接特异性和较低的非特异性背景。

Ø 与 Taq DNA 连接酶相比，具有更高的连接特异性和较低的非特异性背景。

Ø 反应温度范围为 40-70℃，高温下特异性和活性增强，反应温度可接近 80℃。

适用范围

Ø 通过连接酶检测反应和连接酶链式反应，检测等位基因特异性

Ø 连接酶链式反应（LCR）中连接磷酸化寡核苷酸

Ø 高温下连接 DNA 链上的切刻位点

产品包装规格及组成

质量控制

相关测试表明无外源内切、外切脱氧核糖核酸酶、RNase污染和磷酸酯酶，满足常规连接反应要求。PCR方法检测无宿主残余DNA。

酶贮存缓冲液

20 mM Tris-HCl (pH8.0), 150 mM NaCl, 1 mM DTT, 50% glycerol.

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AE1310: 9°N DNA ligase

应用实例

1. 连接反应

1）按下表配制反应体系

2）45-50°C连接15min

3）对于较长的双链DNA底物，琼脂糖电泳检测连接产物；对于短于100bp的短片段DNA，聚丙烯酰胺凝胶电泳检测连接产物。

警告: 本产品仅限科研实验使用，临床应用安全性和有效性未鉴定，不可用于医疗临床诊断。

注意事项

l 推荐 DNA 5´ 末端浓度为 0.1 μM，55℃ 温育。

l 高温下特异性和活性增强，反应温度可接近 80℃，但注意确保反应温度下dsDNA底物没有变成单链DNA。

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